srsf

Wykrywanie metodą cytometrii przepływowej ekspresji fosfatydyloseryny na komórkach

0 Comments

Kontrola wiremii w zakażeniu małpim wirusem niedoboru odporności przez limfocyty CD8 +

Dovezile clinice sugerează că  imunitatea celulară a ularului este implicată în controlul replicării virusului 1 al imunodeficienței umane (HIV-1). Un mannequin animal al sindromului imunodeficienței dobândite (SIDA), virusul imunodeficienței simiene (SIV) Maimuțe rhesus infectati, a fost folosit pentru a arăta că replicarea virusului nu este controlată la maimuțe sărăcite de CD8 +  limfocite in  timpul infectiei SIV primare. Eliminarea CD8 +  limfocite de  la maimuțe în timpul infecției cu SIV cronice a dus la o creștere rapidă și marcată în viremia care a fost suprimat din nou coincident cu reapariția SIV-specifice T CD8 +  celule . Aceste rezultate confirmă importanța  celulei-imunitatea mediată în controlul infecției cu HIV-1 și susținerea explorării abordărilor de vaccinare pentru prevenirea infecției care va provoca aceste răspunsuri imune.

srsf

srsf

Nowatorski check na apoptozę. Wykrywanie metodą cytometrii przepływowej ekspresji fosfatydyloseryny na komórkach wczesnej apoptozy przy użyciu aneksyny V znakowanej fluoresceiną.

În stadiile incipiente ale apoptozei apar modificări la   suprafața celulei , care până acum au rămas dificil de recunoscut. Una dintre aceste modificări ale membranei plasmatice este translocarea fosfatidilserinei (PS) din partea interioară a membranei plasmatice către stratul exterior, prin care PS devine expus la suprafața externă a  celulei . Anexina V este o proteină de legare a fosfolipidelor dependentă de Ca2 + cu afinitate mare pentru PS. Prin urmare, această proteină poate fi utilizată ca sondă sensibilă pentru expunerea la PS pe   membrana celulară .

Translocarea PS către  suprafața celulei externe  nu este unică apoptozei, dar are loc și în timpul   necrozei celulare . Diferența dintre aceste două forme de   moarte celulară este că, în etapele inițiale ale apoptozei,   membrana celulară rămâne intactă, în timp ce în momentul în care apare necroza,   membrana celulară își pierde integritatea și devine scurgeri.

Prin urmare, măsurarea legării anexinei V la   suprafața celulei ca indicativ pentru apoptoză trebuie efectuată împreună cu un check de excludere a coloranților pentru a stabili integritatea   membranei celulare . Această lucrare descrie rezultatele unei astfel de analize, obținute în celulele HSB-2  domesticate , redate apoptotic prin iradiere și în limfocitele umane  , în urma tratamentului cu dexametazona.

Celulele netratate și tratate   au fost consider pentru apoptoză prin microscopie cu lumină, prin măsurarea cantității de celule hipo-diploide   utilizând citometria în flux ADN (FCM) și prin electroforeză ADN pentru a stabili dacă a avut loc sau nu fragmentarea ADN-ului. Legarea anexinei V a fost evaluată utilizând FCM bivariat, iar   colorarea celulară a fost evaluată cu anexina V (fluorescență verde) marcată cu izotiocianat de fluoresceină (FITC), simultan cu excluderea colorantului de iodură de propidiu (PI) (negativă pentru fluorescența roșie).

Testul descris, discriminează celulele intacte   (FITC- / PI-), celulele apoptotice   (FITC + / PI-) și celulele necrotice   (FITC + / PI +). În comparație cu testele tradiționale existente, testul Annexin V este sensibil și ușor de realizat. Testul Annexin V oferă posibilitatea detectării fazelor timpurii ale apoptozei înainte de pierderea   integrității membranei celulare și permite măsurarea cineticii morții apoptotice în raport cu   ciclul celular . FCM mai extins va permite discriminarea între diferite   subpopulații de celule , care pot fi sau nu implicate în procesul apoptotic.

Interleukina-23 zamiast interleukiny-12 jest cytokiną krytyczną dla autoimmunologicznego zapalenia mózgu 

Interleukina-12 (IL-12) este o moleculă heterodimerică compusă din subunități p35 și p40. Analizele efectuate in vitro au definit IL-12 ca un issue necessary pentru diferențierea T naive  celule  în tip T-helper 1 CD4 +  limfocite  secretoare de interferon-gamma (refs 1, 2). În mod comparable, numeroase studii au concluzionat că IL-12 este esențială pentru răspunsurile imune și inflamatorii dependente de celulele T in vivo, în principal prin utilizarea șoarecilor IL-12 p40 direcționați către gene și anticorpi neutralizanți împotriva p40. Citokina IL-23, care cuprinde subunitatea p40 a IL-12, dar o subunitate p19 diferită, este produsă predominant de macrofage și celule dendritice  și prezintă activitate pe celulele T de memorie  .

Dovezile din studiile privind expresia receptorului IL-23 și supraexprimarea IL-23 la șoareci transgenici sugerează, totuși, că IL-23 poate afecta, de asemenea, funcția macrofagelor în mod direct. Aici arătăm, folosind șoareci direcționați către gene care nu au doar IL-23 și studii de înlocuire a citokinelor, că rolul central perceput pentru IL-12 în inflamația autoimună, în particular în creier, a fost interpretat greșit și că IL-23, și nu IL -12, este factorul critic în acest răspuns. În plus, arătăm că IL-23, spre deosebire de IL-12, acționează mai larg ca citokină efectoră în stadiul ultimate prin acțiuni directe asupra macrofagelor.

Analiza fenotypowa limfocytów T specyficznych dla antygenu.

Identificarea și caracterizarea limfocitelor T specifice antigenului   în cursul unui răspuns imun este plictisitoare și indirectă. Pentru a rezolva această problemă, ligandul peptidului-complex de histocompatibilitate majoră (MHC) pentru o populație dată de celule T a   fost multimerizat pentru a produce tetrameri solubili peptidici-MHC. Tetrameri ai  antigenului limfocitar uman  A2 care au fost complexați cu două peptide derivate de virusul imunodeficienței umane (HIV) diferite sau cu o peptidă derivată din proteina matricei gripei A legată de celulele T citotoxice specifice peptidei   in vitro și de celulele T  din sângele persoanelor infectate cu HIV. În basic, legarea tetramerului s-a corelat bine cu testele de citotoxicitate. Această abordare ar trebui să fie utilă în analiza celulelor T   specifice agenților infecțioși, tumorilor și autoantigenelor.

Czasowe powiązanie komórkowych odpowiedzi immunologicznych z początkową kontrolą wiremii w zespole pierwotnego ludzkiego wirusa niedoboru odporności typu 1.

Studiile virologice și imunologice au fost efectuate pe cinci pacienți care prezentau infecție cu virusul imunodeficienței umane primare tip 1 (HIV-1).  Precursorii limfocitelor T citotoxice CD8 +  specifici pentru  celulele care  exprimă antigene ale HIV-1 Gag, Pol și Env au fost detectați la sau în termen de three săptămâni de la prezentare la patru din cei cinci pacienți și au fost detectați la toți cei cinci pacienți cu three până la 6 luni după prezentare.

Singurul pacient cu o inițială absent răspuns CTL au prelungit simptome, viremie persistentă, și T CD4 + scazut de celule  COUNT. Activitatea de neutralizare a anticorpilor a fost absentă la momentul prezentării la toți cei cinci pacienți. Aceste descoperiri sugerează că  imunitatea celulară a ularului este implicată în controlul inițial al replicării virusului în infecția primară cu HIV-1 și indică un rol pentru CTL în imunitatea de protecție la HIV-1 in vivo .

 

 

Myszy z niedoborem RAG-1 nie mają dojrzałych limfocytów B i T.

 

Gena de activare a recombinării V (D) J RAG-1 a fost izolată pe baza capacității sale de a activa recombinarea V (D) J pe un substrat synthetic în fibroblaste. Această proprietate și modelul de expresie în țesuturi și   linii celulare indică faptul că RAG-1 activează sau catalizează reacția de recombinare V (D) J a imunoglobulinei și a  genelor receptorilor de celule T. Noi aici descrie introducerea unei mutații în RAG-1 în germline șoarecilor prin țintirii genei in stem embrionare  celule . Șoarecii cu deficit de RAG-1 au organe limfoide mici care nu conțin limfocite B și T mature  .

Arestarea  diferențierii celulelor B și T  are loc într-un stadiu incipient și se corelează cu incapacitatea de a efectua recombinarea V (D) J. Sistemul imunitar al șoarecilor mutanți RAG-1 poate fi descris ca fiind cel al șoarecilor scid non-scurgeri. Deși expresia RAG-1 a fost raportată în sistemul nervos central al șoarecelui, nu au fost găsite anomalii neuroanatomice sau comportamentale evidente la șoarecii cu deficit de RAG-1.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *